生物组织蛋白质检测

检测项目

1.总蛋白含量测定：采用BCA法（波长562nm）或Lowry法（波长750nm），检测限0.5μg/mL

2.SDS-PAGE电泳纯度分析：分离胶浓度8%-15%，电压200V恒压运行45分钟

3.WesternBlot特异性检测：一抗孵育条件4℃12-16小时（稀释比1:1000-1:5000）

4.质谱定量分析：LC-MS/MS系统（质量精度<3ppm），动态范围10^4-10^5

5.翻译后修饰检测：磷酸化位点鉴定（HCD碎裂能量28%），糖基化位点覆盖率≥85%

检测范围

1.动物组织样本：哺乳动物器官组织（肝脏/脑/肾脏）冷冻切片

2.细胞培养物：贴壁/悬浮细胞裂解液（RIPA缓冲液提取）

3.血液制品：血清/血浆样本（离心条件3000g15min）

4.植物样本：叶片/根茎组织匀浆液（液氮研磨处理）

5.重组蛋白制品：大肠杆菌/CHO细胞表达产物（纯度≥90%）

检测方法

1.ISO21572:2019食品中蛋白质免疫印迹分析方法

2.ASTME2694-21紫外分光光度法测定蛋白质浓度标准规程

3.GB/T28718-2012血清总蛋白的双缩脲测定法

4.GB5009.5-2016食品中蛋白质的凯氏定氮法

5.ISO20914:2019医学实验室-液相色谱-质谱联用定量方法验证指南

检测设备

1.NanoDropOnec微量分光光度计（ThermoFisher）：1μL样本量程，波长范围190-850nm

2.ChemiDocMP成像系统（Bio-Rad）：化学发光/荧光多模式检测，分辨率4.3MP

3.QExactiveHF-X质谱仪（ThermoFisher）：240,000分辨率，扫描速度18Hz

4.AKTApure25层析系统（Cytiva）：流速范围0.001-25mL/min，压力上限25MPa

5.Mini-PROTEANTetra电泳槽（Bio-Rad）：同时运行4块810cm胶板

6.OdysseyCLx红外成像仪（LI-COR）：双色激光通道（680/800nm）

7.MultiskanSkyHigh酶标仪（ThermoFisher）：6种光路模式，温控范围4-45℃

8.LabChipGXIITouch微流控系统（PerkinElmer）：蛋白质分子量分析精度5%

9.Agilent2100生物分析仪（Agilent）：芯片电泳技术实现pg级蛋白检测

10.CryoStarNX50液氮罐（Taylor-Wharton）：静态蒸发率≤0.12L/day