禽流感病毒检测

检测项目

1.病毒分离鉴定：通过鸡胚接种法分离活病毒，测定HA效价≥1:16为阳性判定阈值

2.核酸检测（RT-PCR）：靶向M基因保守区设计引物，Ct值≤35判定为阳性

3.亚型分型检测：针对HA（H1-H16）和NA（N1-N9）基因进行多重PCR扩增

4.血凝抑制试验（HI）：测定血清抗体效价≥1:32具有保护效力

5.神经氨酸酶抑制试验：使用荧光底物测定NA活性抑制率≥50%为有效

检测范围

1.活禽样本：包括咽喉拭子、泄殖腔拭子及血液样本

2.禽类产品：冻品肌肉组织、肝脏及蛋类制品

3.环境介质：养殖场空气沉降物、饲料及饮用水样本

4.疫苗产品：灭活疫苗抗原含量测定及效力检验

5.生物材料：实验用SPF鸡胚及细胞培养物

检测方法

1.ISO11737-2:2019生物负载量评估规范

2.GB/T19438.1-2004禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法

3.OIETerrestrialManualChapter3.3.4病毒中和试验规程

4.GB/T18936-2020高致病性禽流感诊断技术规范

5.SN/T1182.3-2020进出境禽类检疫技术标准

检测设备

1.ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪（核酸检测）

2.EppendorfCellCultureCO2培养箱（病毒分离培养）

3.BeckmanCoulterVi-CELLXR细胞活力分析仪（细胞病变观察）

4.GEHealthcareAKTApure蛋白纯化系统（抗原制备）

5.SartoriusBIOSTATB-DCUII生物反应器（疫苗效力评估）

6.PerkinElmerEnVision多模式读板机（ELISA抗体检测）

7.ZeissAxioObserver7倒置荧光显微镜（病毒蚀斑分析）

8.MalvernPanalyticalZetasizerNanoZS粒径分析仪（病毒颗粒表征）

9.BiacoreT200分子互作仪（抗原抗体亲和力测定）

10.MiltenyiBiotecGentleMACS组织解离器（样本前处理）