兔轮状病毒检测

检测项目

1.病毒抗原检测：采用双抗体夹心ELISA法，灵敏度≥95%，特异性≥98%

2.RNA定量分析：RT-qPCR扩增效率90-110%，Ct值判定阈值≤35

3.VP6蛋白免疫印迹：使用单克隆抗体HRP标记物，条带显影分辨率达0.5ng/μL

4.血清分型检测：中和试验抗体效价≥1:64为阳性判定标准

5.电镜形态学观察：负染样品浓度≥10^6TCID50/mL

检测范围

1.临床样本：腹泻幼兔粪便悬液（采集量≥1g）

2.病理材料：肠系膜淋巴结组织匀浆（保存温度-80℃）

3.细胞培养物：MA104细胞系病毒分离物（传代≤5代）

4.疫苗产品：灭活疫苗抗原含量测定（批抽样比例≥5%）

5.环境样本：养殖场水样过滤浓缩液（孔径0.22μm滤膜）

检测方法

1.ISO15189:2012《医学实验室质量和能力要求》病毒分离规范

2.ASTME2888-19《病毒滴度测定标准指南》空斑形成单位计数法

3.GB/T22917-2008《兔病毒性出血症诊断技术》血清学交叉试验细则

4.GB/T14926.52-2001《实验动物微生物学检验方法》电镜制样规程

5.SN/T3567.4-2013《国境口岸轮状病毒检测》实时荧光RT-PCR法

检测设备

1.实时荧光PCR仪（Bio-RadCFX96）：支持FAM/HEX双通道同步检测

2.全自动酶标仪（ThermoMultiskanFC）：波长范围340-850nm1nm

3.透射电子显微镜（HitachiHT7800）：加速电压40-120kV可调

4.高速冷冻离心机（Eppendorf5424R）：最大RCF21,130g

5.核酸提取工作站（QiagenQIAcube）：通量8-96样本/批次

6.凝胶成像系统（Bio-RadChemiDocMP）：CCD像素500万以上

7.II级生物安全柜（EscoAC2-4S1）：风速0.300.025m/s

8.CO₂恒温培养箱（MemmertIF75）：温度波动度0.3℃

9.超低温冰箱（HaierDW-86L728）：保存温度-86℃3℃

10.梯度PCR仪（AnalytikJenaTProfessional）：升降温速率≥4℃/s