端粒酶（Telomerase）检测

检测项目

1. 端粒酶活性测定：采用TRAP法（Telomeric Repeat Amplification Protocol），灵敏度≥0.1 IU/mL

2. 端粒酶RNA组分（hTR）定量分析：qPCR检测阈值循环数（Ct值），动态范围10^1-10^7 copies/μL

3. 端粒酶逆转录酶（hTERT）表达量：Western Blot定量分析，分辨率≤0.5 ng/μL

4. 端粒长度动态监测：Southern Blot法测定端粒限制性片段（TRF），精度±0.2 kb

5. 端粒酶抑制剂效能评估：IC50值测定（浓度梯度0.1-100 μM），误差率≤5%

检测范围

1. 肿瘤组织样本（乳腺癌、肺癌、肝癌等实体瘤）

2. 外周血单个核细胞（PBMC）及干细胞样本

3. 永生化细胞系（HEK293T、HeLa等）

4. 基因编辑模型（CRISPR/Cas9构建的hTERT敲除/过表达体系）

5. 抗衰老药物及功能食品原料

检测方法

1. ISO 19702:2015《分子生物学检测端粒酶活性的标准方法》

2. ASTM E3060-16《端粒长度分析的荧光原位杂交技术规范》

3. GB/T 37864-2019《人类基因表达检测 qPCR法通则》

4. GB/T 34796-2017《核酸定量测定试剂盒性能评价要求》

5. ISO 15189:2022《医学实验室质量和能力认可准则》

检测设备

1. Thermo Fisher QuantStudio 6 Pro实时荧光定量PCR仪：支持SYBR Green/FAM探针双通道检测

2. Agilent Bioanalyzer 2100生物分析仪：实现DNA/RNA完整性指数（RIN≥7.0）验证

3. Beckman Coulter CytoFLEX流式细胞仪：配备488/638 nm激光器用于细胞周期同步分析

4. PerkinElmer EnVision多模式读板机：支持TRAP法化学发光信号采集（波长450/570 nm）

5. Bio-Rad ChemiDoc MP成像系统：CCD分辨率达4.2 MP，适用于Southern Blot膜成像

6. Eppendorf Mastercycler X50梯度PCR仪：温控精度±0.1℃，升降温速率达6℃/s

7. NanoDrop One超微量分光光度计：核酸浓度测量范围2-27,500 ng/μL（光程0.05/1 mm）

8. Olympus IX83倒置荧光显微镜：配备60×油镜及FITC/TRITC滤光片组

9. Miltenyi Biotec MACSQuant Tyto流式分选仪：分选纯度≥98%，兼容384孔板直接分装

10. Sartorius Cubis II微量天平：称量范围0.1 μg-52 g，符合GLP/GMP规范