检测项目
1.酶活性测定:单位时间底物转化量(μmol/min/mg),温度控制0.1℃
2.动力学参数:Km值(0.5-5.0mM)、Vmax(10-200U/mg)
3.热稳定性:37℃孵育30min活性保留率≥85%
4.pH耐受性:最适pH范围6.8-7.4(0.05)
5.抑制剂敏感性:硫氰酸盐(0.1-10mM)半数抑制浓度IC50
6.金属离子效应:Zn+(0-100μM)对催化活性的影响
检测范围
1.人/动物血清/血浆样本(采集后-80℃保存≤6个月)
2.甲状腺组织匀浆液(离心后上清液蛋白浓度≥2mg/mL)
3.重组表达酶制剂(纯度≥95%,SDS-PAGE验证)
4.含碘药物代谢产物(T3/T4浓度0.1-10ng/mL)
5.环境污染物暴露模型样本(双酚A暴露量≤50μg/L)
6.细胞培养上清液(传代次数≤5次)
检测方法
1.ISO15193:2009《体外诊断医疗器械-生物源性样品中量的测量-酶催化浓度测量参考方法》
2.ASTME2935-13《StandardGuideforEnzymeActivityAssays》
3.GB/T22244-2008《保健食品中甲状腺素测定》液相色谱法
4.GB/T35809-2018《实验室质量控制规范分子生物学检测》
5.CLSIEP05-A3《EvaluationofPrecisionofQuantitativeMeasurementProcedures》
6.JISK0400-66-10《水质-酶活性测定通则》
检测设备
1.ThermoScientificMultiskanSkyHigh全波长酶标仪(波长范围200-1000nm)
2.Agilent1260InfinityIIHPLC系统(配备DAD检测器)
3.EppendorfMastercyclerX50梯度PCR仪(温控精度0.1℃)
4.BeckmanCoulterAU5800全自动生化分析仪(支持双试剂法)
5.MalvernZetasizerNanoZSP动态光散射仪(粒径测量范围0.3nm-10μm)
6.WatersXevoTQ-S微升流超高效液相色谱串联质谱仪(MRM模式)
7.HitachiUH4150紫外可见分光光度计(带宽0.1/0.5/1/2/5nm可调)
8.MettlerToledoSevenExcellencepH计(分辨率0.001pH)
9.SartoriusCubisII半微量天平(最小称量值0.01mg)
10.ThermoScientificHeracellVIOS160iCO₂培养箱(温度均一性0.3℃)