检测项目

1.酶活性测定：催化速率范围0.1-50μmol/min/mg蛋白（37℃标准体系）

2.底物亲和力分析：Km值测定（丙二酰-CoA浓度梯度0.05-5mM）

3.最适pH值测试：pH梯度5.0-9.0（Tris-HCl缓冲体系）

4.温度稳定性评估：20-50℃热稳定性曲线（半衰期t1/2计算）

5.抑制剂效应验证：IC50值测定（浓度梯度0.01-100μM）

检测范围

1.哺乳动物肝脏/肾脏组织匀浆液

2.重组表达纯化酶制剂（纯度≥95%）

3.线粒体分离组分（密度梯度离心制备）

4.微生物发酵产物（大肠杆菌/酵母表达系统）

5.临床血清样本（抗凝处理EDTA-K2管采集）

检测方法

1.分光光度法：ISO15193:2009（340nmNADH氧化还原监测）

2.放射性同位素法：GB/T37871-2019（14C标记丙二酰-CoA示踪）

3.HPLC-MS联用法：ASTMD8371-21（产物丙二酸定量分析）

4.荧光探针法：GB/T40154-2021（DTNB显色反应体系）

5.等温滴定量热法：ISO/TR23437:2021（热力学参数测定）

检测设备

1.ThermoScientificMultiskanSkyHigh酶标仪（波长范围340-750nm）

2.Agilent1260InfinityIIHPLC系统（C18反相色谱柱）

3.BeckmanCoulterOptimaXPN-80超速离心机（最大转速80,000rpm）

4.MalvernPanalyticalMicroCalPEAQ-ITC量热仪（灵敏度0.1μcal/s）

5.EppendorfMastercyclerX50梯度PCR仪（温控精度0.1℃）

6.PerkinElmerTri-Carb4910TR液闪计数器（14C探测效率≥95%）

7.Metrohm848TitrinoPlus自动滴定仪（pH分辨率0.001）

8.ShimadzuUV-2600i分光光度计（双光束光学系统）

9.SartoriusCubisII微量天平（称量精度0.1μg）

10.MettlerToledoSevenExcellencepH计（自动温度补偿功能）