检测项目

1.酶活性测定：单位时间内底物转化量（nmol/min/mg），采用放射性同位素标记法

2.特异性分析：CpG位点识别准确度（≥98%），双链DNA结合能力测试

3.热稳定性评估：37℃条件下活性保留率（0-72小时衰减曲线）

4.pH耐受性测试：工作范围（pH6.0-8.5）及最佳反应pH值测定

5.抑制剂敏感性：IC50值测定（5-azacytidine系列浓度梯度实验）

检测范围

1.基因组DNA样本（哺乳动物/植物/微生物来源）

2.体外诊断试剂盒（甲基化修饰试剂组分）

3.重组蛋白制品（DNMT1/DNMT3A/DNMT3B亚型）

4.细胞培养物（肿瘤细胞系/干细胞系）

5.临床组织样本（福尔马林固定石蜡包埋组织）

检测方法

ISO17025:2017《分子生物学检测通用要求》

GB/T30988-2014《DNA甲基转移酶活性测定方法》

ASTME2148-16《体外酶促反应体系标准化规程》

ISO15189:2022《医学实验室质量和能力要求》

GB/T37871-2019《核酸修饰酶类产品技术要求》

检测设备

1.Agilent1260InfinityIIHPLC：甲基化产物定量分析（0.1-100μM线性范围）

2.ThermoQExactiveHF-X质谱仪：精确分子量测定（分辨率≥240,000）

3.BeckmanCoulterDTX880微孔板读数仪：荧光强度检测（灵敏度0.01nmol）

4.EppendorfMastercyclerX50PCR仪：温度梯度反应控制（0.1℃精度）

5.Bio-RadChemiDocMP成像系统：Westernblot定量分析（动态范围4.8OD）

6.MalvernZetasizerNanoZSP：蛋白质稳定性动态光散射分析

7.PerkinElmerTri-Carb4910TR液闪计数器：放射性标记物定量测量

8.SartoriusCubisIIMSA225S分析天平：微量样品称量（0.001mg精度）

9.ThermoScientificVarioskanLUX酶标仪：多波长吸光度同步检测

10.EppendorfCentrifuge5430R高速离心机：样品前处理（30,000g离心力）