可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法与参考 |
|---|---|---|---|
| 番茄穴盘幼苗 | 种苗企业抗性诱导筛选、诱抗剂效果初评 | 防御酶活性(苯丙氨酸解氨酶、过氧化物酶、多酚氧化酶)、过氧化氢积累、胼胝质沉积、病情指数、诱导防效 | 喷雾接种加挑战接种程序、分光光度酶活测定、病情分级调查 |
| 番茄离体叶片与叶盘 | 激发子批量初筛、防御响应快速评价 | 防御基因相对表达、电解质渗漏率、病斑扩展面积、过敏性反应强度 | 注射接种、实时荧光定量相对定量、图像分析法 |
| 番茄成株期植株 | 盆栽与大田防效验证、系统获得抗性评价 | 水杨酸含量、病程相关蛋白活性、系统叶防御响应、病情指数 | 高效液相色谱法、比色法、分级调查法 |
| 番茄种子 | 种传健康核查、批次带菌筛查 | 种子带菌率、发芽率、健康幼苗比例 | GB/T 3543.5-1995健康测定、GB 16715.3-2010茄果类种子要求 |
| 番茄组培无菌苗 | 无菌体系诱导机制研究、激发子纯度评价 | 防御基因表达谱、活性氧爆发动态、细胞死亡染色计数 | 无菌接种、显微观察与图像计数 |
| 番茄果实 | 采前抗性诱导评价、采后病害防控方案验证 | 果面病斑直径、防御酶活性、木质素与胼胝质沉积 | 刺伤接种、病斑直径测量法 |
| 茄科近缘模式植株 | 诱导通路对照验证、交叉抗性研究 | 防御标记基因表达、酶活对照谱 | 本氏烟叶片瞬时评价、比色法 |
检测项目
1. 防御酶活性动态:苯丙氨酸解氨酶、过氧化物酶、多酚氧化酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶,诱导后24-72小时活性升高2-8倍
2. 活性氧爆发与胼胝质沉积:过氧化氢积累强度升高1-5倍,胼胝质沉积点密度每平方毫米0-200个
3. 水杨酸含量:游离态每克鲜重0.1-10微克量级,有效诱导后升高2-10倍
4. 防御基因相对表达量:病程相关蛋白基因与苯丙烷途径基因变化倍数0.01-100
5. 病情指数与诱导防效:病情指数0-100,单株分级0、1、3、5、7、9级,防效30%-70%判定为有效诱导
检测范围
1. 番茄幼苗:3-5叶期穴盘苗、嫁接苗,樱桃番茄与普通栽培种
2. 番茄离体材料:叶盘、整叶、叶柄切段
3. 番茄成株:苗期、开花期、结果期盆栽与大田植株
4. 番茄种子与组培苗:种传健康核查样本、无菌苗体系
5. 茄科近缘植株:本氏烟、茄子、辣椒叶片对照材料
检测方法
1. GB/T 3543.5-1995 农作物种子检验规程 健康测定
2. GB 16715.3-2010 瓜菜作物种子 第3部分:茄果类
3. GB 19489-2008 实验室 生物安全通用要求
4. GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范 植物检疫
5. GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法
6. JJG 705-2014 液相色谱仪检定规程
检测设备
1. 光照培养箱:温度15-35℃,光照强度每平方米每秒0-300微摩尔光量子,湿度50%-95%
2. 人工气候室:温度10-40℃波动±1℃,分层控光,容积2-15立方米
3. 实时荧光定量聚合酶链式反应仪:96通道,升降温速率每秒6℃,荧光检测通道5个
4. 紫外-可见分光光度计:波长190-1100纳米,光谱带宽1纳米
5. 全波长酶标仪:波长200-999纳米连续可调,读数重复性偏差小于1%
6. 高效液相色谱仪:四元梯度泵,紫外检测波长280纳米,进样精度0.1微升
7. 高速冷冻离心机:最高转速每分钟30000转,温控范围-10℃至40℃
8. 组织研磨匀浆仪:振荡频率每秒5-60赫兹,单次处理24-96个样品
9. 恒温振荡培养箱:温度20-45℃,转速每分钟50-400转
10. 荧光显微镜:放大倍数40-1000倍,配紫外与蓝绿激发模块