可送检的样品类型与对应检测项目

样品类型 典型应用场景 主要检测项目 常用方法 / 参考
甘薯脱毒组培苗 茎尖培养脱毒后代复检、脱毒种薯繁育体系核心材料确认 SPFMV羽状斑驳病毒、SPCSV褪绿矮化病毒、SPLCV曲叶病毒、SPVG等主要病毒全项筛查与带毒率统计 DAS-ELISA酶联免疫筛查、多重RT-PCR确证、实时荧光定量RT-PCR评估带毒量
甘薯种薯与种苗（原原种、原种、生产用种） 脱毒种薯分级验收、种苗调运检疫、繁育田批次抽检 主要病毒带毒率、SPVD复合侵染确认、批次抽检合格率评定 NCM-ELISA硝酸纤维素膜法批量筛查、GB 15569-1995调运检疫程序
田间疑似病株叶片与叶柄 羽状斑驳、褪绿矮化、曲叶黄化等症状确诊、病毒病流行调查 症状对应病毒种类鉴定、复合侵染组合分析、病毒粒子形态观察 RT-PCR扩增产物测序确证、透射电镜负染观察丝状病毒粒子
窖藏块根与育苗排薯 窖藏种薯出库前健康检查、南繁北调种薯复检 块根传毒确认、萌芽期隐症带毒检测 取萌芽嫩梢进行ELISA检测、RT-PCR复核
指示植物嫁接鉴定材料 生物学鉴定复核、弱毒株与隐症材料的补充确认 巴西牵牛系统症状反应观察、潜隐病毒确认 嫁接传染试验、症状分级记录、结合血清学复核

检测项目

1. 甘薯羽状斑驳病毒（SPFMV）：ELISA阳性判读OD405不低于2.5倍阴性对照，田间侵染率常见10%-60%

2. 甘薯褪绿矮化病毒（SPCSV）：单侵染症状轻微，与SPFMV复合构成SPVD，协同减产可达50%-90%

3. 甘薯曲叶病毒（SPLCV）：双生病毒基因组约2.8kb，经白粉虱传播，引发曲叶与黄化症状

4. 脱毒种苗带毒率：脱毒核心种苗要求主要病毒零检出，原种与生产用种逐级放宽并按批次抽检

5. 复合侵染分析：SPVD确认须同时检出SPCSV与SPFMV，多重RT-PCR可一管双靶同步扩增

检测范围

1. 脱毒甘薯种苗：茎尖组培脱毒核心苗、原原种、原种各级繁育材料

2. 田间植株：表现羽状斑驳、紫褐色环斑、明脉、矮化症状的叶片与叶柄

3. 种薯块根：窖藏种薯、调运排薯及其萌芽嫩梢

4. 组培继代材料：长期继代培养苗与复检脱毒材料

5. 指示植物：巴西牵牛嫁接传染鉴定材料及温室盆栽复核样本

检测方法

1. GB 15569-1995 农业植物调运检疫规程，规范种薯种苗调运中的病毒检疫程序

2. GB/T 3543.5-1995 农作物种子检验规程 健康测定，种苗健康状况检验基础方法

3. GB/T 28071-2011 马铃薯Y病毒检疫鉴定方法，同属病毒酶联免疫与RT-PCR技术参照

4. 国际植保公约ISPM 27 限定有害生物鉴定规程，病毒类有害生物鉴定通用框架

5. 参考国际马铃薯研究中心CIP发布的NCM-ELISA甘薯病毒检测标准操作规程，适用于批量种苗筛查

检测设备

1. 酶标仪：双波长405与490纳米，吸光度分辨率0.001OD，兼容96孔微孔板

2. 恒温振荡培养箱：温度25-37℃±0.5℃，振荡转速50-300转每分钟

3. 梯度PCR仪：96孔模块，升降温速率6℃每秒，温度范围4-99℃

4. 实时荧光定量PCR仪：四通道FAM、HEX、ROX、Cy5荧光检测，检出限达拷贝级

5. 高速冷冻离心机：最大转速15000转每分钟，温控-10-40℃

6. 凝胶电泳系统与成像仪：琼脂糖凝胶电泳配302纳米紫外凝胶成像

7. 透射电子显微镜：加速电压80-120千伏，负染观察丝状病毒粒子长度650-900纳米

8. 超低温保存箱：温度-86℃，波动±2℃，用于样品与试剂保存

9. 超净工作台：垂直层流，洁净度达到百级，用于无毒操作

10. 组织研磨仪：振荡频率30赫兹，兼容96孔深孔板批量研磨