小麦瘟病检测

检测项目

1.病原菌形态学鉴定：菌丝直径（3-5μm）、分生孢子尺寸（18-258-12μm）、附着胞形成率（≥85%）

2.分子生物学检测：Mg-SINE基因片段扩增（引物序列：F:5'-CGGTGAACCTGCGGAAGG-3',R:5'-TCGATGCGTTGGGTAACTCG-3'）

3.孢子悬浮液浓度测定：标准阈值范围（110^5~510^6spores/mL）

4.侵染率评估：病斑面积占比分级（0级：无病斑；5级：＞50%叶面积）

5.抗病基因筛查：Pm1a/Pm3d/Pm21等位基因特异性标记检测

检测范围

1.冬小麦/春小麦植株样本（叶片、茎秆、穗部）

2.种子带菌量检测（千粒重≤45g品种）

3.土壤残留病原菌定量分析（耕作层0-20cm）

4.田间病株分离纯化培养物（PDA培养基28℃暗培养）

5.气传孢子捕捉样本（旋转式孢子捕捉器24h连续监测）

检测方法

ISO16140-3:2021食品链微生物学-方法验证-第3部分：特定应用协议拟订指南

GB/T36855-2018植物检疫病原真菌鉴定规范

NY/T3087-2017小麦抗病性鉴定技术规程瘟病

SN/T4283.2-2015国境口岸传染病检测规程第2部分：植物病原真菌实时荧光PCR方法

ASTME1755-01(2020)植物材料中真菌生物量测定的标准方法

检测设备

ThermoFisherQuantStudio5Real-TimePCRSystem：用于Mg-SINE基因拷贝数定量分析

OlympusBX53正置荧光显微镜：配备DP27摄像系统进行孢子形态测量

BioTekSynergyH1酶标仪：读取ELISA板测定毒素含量（波长450nm）

LeicaCM1950冷冻切片机：制作10μm厚度的病斑组织切片

SartoriusQuintix224-1CN分析天平：精确称量0.1mg~220g样本

EppendorfCentrifuge5430R：最大转速30,000rpm完成孢子富集

BinderKB115恒温培养箱：温度控制精度0.3℃的病原菌培养环境

BurkardHirst型孢子捕捉器：24小时连续空气采样流量10L/min

MilestoneETHOSUP微波消解仪：完成植物组织DNA快速提取前处理