环斑病毒病检测

检测项目

1.外壳蛋白基因（CP）序列扩增：采用RT-PCR技术检测CP基因保守区段（目标片段长度680bp5%）

2.RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）活性测定：酶活单位≥0.8U/μg为阳性阈值

3.病毒粒子形态学观察：透射电镜成像直径28-32nm二十面体结构

4.ELISA血清学检测：OD450值≥0.35判定为阳性反应

5.全基因组测序分析：覆盖度≥99%，测序深度≥50

检测范围

1.茄科植物（番茄/辣椒/烟草）叶片样本

2.葫芦科作物（西瓜/甜瓜/黄瓜）茎秆组织

3.豆科植物（菜豆/大豆）种子浸提液

4.土壤基质中病毒残留物

5.农用器械表面生物膜样本

检测方法

ISO16140-6:2019《微生物检测方法验证规范》病毒分离程序

GB/T28057-2020《植物病毒实时荧光RT-PCR检测通则》

ASTME3066-18《植物病原体免疫测定标准指南》

SN/T2123-2022《进出境种苗环斑病毒检疫规程》

EPPOPM7/98(2)《环斑病毒诊断协议》

检测设备

ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪（动态范围1-40个循环）

Agilent2100Bioanalyzer生物分析仪（RNA完整性数≥8.0）

JEOLJEM-1400Flash透射电子显微镜（分辨率0.38nm）

BioTekSynergyH1多功能酶标仪（波长精度1nm）

IlluminaNovaSeq6000测序系统（通量6Tb/run）

EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机（最大RCF30,130g）

MiltenyiBiotecgentleMACS组织匀浆系统（裂解效率≥95%）

NanodropOne超微量分光光度计（测量精度0.1ng/μL）

SartoriusCubisII精密天平（称量精度0.01mg）

ESCOClassIIA2型生物安全柜（风速0.380.025m/s）