检测项目

1.花粉活力测定：采用碘-碘化钾染色法（萌发率≥85%）、离体萌发法（培养基蔗糖浓度15%+硼酸0.01%）

2.S基因型鉴定：SSR分子标记分析（引物退火温度58-62℃）、S-RNase蛋白电泳（SDS-PAGE12%分离胶）

3.柱头可授性测试：联苯胺-过氧化氢法（反应时间8-10min）、苯胺蓝荧光染色（激发波长365nm）

4.自交结实率统计：人工授粉后14天测定子房膨大率（重复3次/样本）

5.蛋白质互作分析：酵母双杂交系统（pGADT7/pGBKT7载体）、Pull-down实验（His标签纯化）

检测范围

1.十字花科作物：甘蓝型油菜（Brassicanapus）、萝卜（Raphanussativus）自交系

2.茄科植物：番茄（Solanumlycopersicum）、烟草（Nicotianatabacum）突变体

3.禾本科作物：黑麦草（Loliumperenne）、玉米（Zeamays）三系材料

4.蔷薇科果树：苹果（Malusdomestica）、梨（Pyrusspp.）栽培品种

5.豆科植物：紫花苜蓿（Medicagosativa）、大豆（Glycinemax）近等基因系

检测方法

1.GB/T3543.4-1995《农作物种子检验规程发芽试验》花粉离体萌发法

2.ISO2400:2015《分子生物学检测指南》SSR标记分析规范

3.ASTMF2065-18《荧光显微术标准指南》柱头荧光染色观察

4.GB/T38576-2020《植物品种特异性鉴定指南》S等位基因分型技术

5.ISO21572:2019《食品中蛋白质检测方法》Westernblot验证标准

检测设备

1.OlympusCX43荧光显微镜：配备U-FBWA滤光片组（激发波长330-385nm）

2.Bio-RadCFX96实时定量PCR仪：支持HRM高分辨率熔解曲线分析

3.EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机：最大转速30,000rpm（温度控制1℃）

4.Agilent2100生物分析仪：蛋白质浓度测定精度0.1μg/μl

5.LeicaCM1950冰冻切片机：样本厚度调节范围1-50μm（温度-35℃至-20℃）

6.ThermoScientificNanoDropOne紫外分光光度计：核酸纯度OD260/280比值测定

7.LI-COROdysseyCLx红外成像系统：双色荧光Westernblot检测（700/800nm通道）

8.MemmertIPP400培养箱：温度控制精度0.3℃（湿度调节范围30-95%）

9.SartoriusQuintix224-1CN电子天平：称量精度0.1mg（最大量程220g）

10.AmershamImager600凝胶成像系统：CCD分辨率520万像素（动态范围4.8OD）