检测项目
1.重复序列富集度分析:采用全基因组测序技术(WGS)测定卫星DNA(SatelliteDNA)含量≥85%的区域分布
2.CpG岛甲基化水平测定:通过亚硫酸氢盐测序法(BSP)检测DNA甲基化率(0-100%),分辨率达单碱基水平
3.组蛋白H3K9me3修饰定量:使用ChIP-seq技术测定组蛋白修饰密度(RPKM≥5.0为阳性阈值)
4.核小体占位率分析:MNase-seq法测定核小体定位精度20bp误差范围
5.异染色质蛋白1(HP1)结合效率:荧光共振能量转移(FRET)法测定结合亲和力Kd≤10nM
检测范围
1.哺乳动物细胞系(HEK293、HeLa等)的永久性异染色质区域
2.植物组织样本端粒相关组成型异染色质
3.临床病理切片中癌变细胞的异染色质异常聚集区域
4.模式生物(果蝇多线染色体、线虫生殖细胞)的组成型异染色质结构
5.基因编辑模型(CRISPR/Cas9修饰)的异染色质重组效应评估
检测方法
1.ISO10993-5:2009细胞遗传毒性试验中异染色质损伤评估标准
2.ASTME2148-16荧光原位杂交(FISH)技术规范
3.GB/T30988-2014DNA甲基化高通量检测方法通则
4.ISO/IEC17025:2017核小体定位分析的实验室能力要求
5.GB/T37871-2019组蛋白修饰质谱检测技术规范
检测设备
1.NikonEclipseNi-E荧光显微镜:配备DS-Ri2相机(分辨率61446144像素),支持FISH成像分析
2.IlluminaNovaSeq6000测序系统:全基因组测序通量≥20Tb/run,用于重复序列定位
3.ThermoFisherQExactiveHF-X质谱仪:质量精度<3ppm,组蛋白修饰定量分析专用设备
4.ZeissLSM980Airyscan2共聚焦显微镜:空间分辨率120nm,HP1蛋白动态追踪系统
5.Agilent4200TapeStation系统:DNA完整性检测(DIN≥7.0为合格标准)
6.BeckmanCoulterCytoFLEXS流式细胞仪:488nm/640nm双激光配置,核小体占位率批量检测
7.PerkinElmerChemiDocMP成像系统:化学发光法甲基化条带定量分析模块
8.EppendorfMastercyclerX50PCR仪:温控精度0.1℃,支持亚硫酸氢盐转化程序
9.Bio-RadCFXOpus96实时定量PCR系统:SYBRGreen法甲基化特异性扩增验证
10.LeicaEMICE高压冷冻仪:样品冷冻速率>20,000℃/s,保持染色质天然结构