可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| 重组蛋白与抗体纯化成品 | 大肠杆菌、毕赤酵母、CHO表达体系的质量研究与放行检测 | 主峰纯度、单体纯度、电泳纯度、聚集体与片段比例 | GB/T 16631-2008；《中国药典》四部分子排阻色谱法 |
| 疫苗与生物制品中间体 | 原液、柱层析馏分、超滤浓缩液的过程纯度监控 | 纯度谱图比对、宿主蛋白残留、残留DNA、片段化程度 | SEC-HPLC；CE-SDS毛细管电泳；酶联免疫法 |
| 酶与工具酶试剂 | 限制性内切酶、聚合酶、诊断用酶的纯度定级与比活力核算 | 电泳纯度条带分析、比活力、核酸污染核查 | SDS-PAGE；紫外A280结合酶活力测定 |
| 食品与营养蛋白粉 | 浓缩乳清蛋白、大豆分离蛋白、豌豆蛋白的纯度标签核验与定级 | 蛋白质含量干基换算、纯度百分比、非蛋白氮掺伪筛查 | GB 5009.5-2016；GB/T 6432-2018 |
| 蛋白标准品与校准品 | 定值用标准物质、质控品的纯度赋值与批间一致性验证 | 双正交方法纯度定值、水分与灰分校正、均匀性核查 | GB/T 27417-2017方法验证；SEC-MALS |
| 科研纯化中间品 | 细胞裂解上清、亲和层析与离子交换馏分、冻干复溶样品 | 纯度变化跟踪、目标蛋白富集倍数、杂质清除率 | SDS-PAGE快速电泳；BCA定量联用 |
检测项目
1. 主峰纯度：C4或C18反相色谱柱梯度洗脱，紫外214nm与280nm双波长监测，主峰面积归一化百分比，放行典型要求不低于95%；
2. 单体纯度：分子排阻色谱表征单体、片段与聚集体分布，聚集体典型控制限不高于2%，稳定性考察中持续追踪；
3. 电泳纯度：SDS-PAGE还原与非还原双条件分析，考马斯亮蓝染色条带扫描，分辨率1%-2%；CE-SDS毛细管电泳可量化轻重链比例；
4. 肽图与序列覆盖：胰蛋白酶酶切后液质联用肽段匹配，序列覆盖率典型要求不低于90%，确证产物分子完整性；
5. 相关杂质谱：宿主细胞蛋白双抗体夹心酶联免疫法定量下限约1ng/mL，残留DNA荧光法达pg级，与纯度谱图联合报告。
检测范围
1. 重组蛋白：大肠杆菌、毕赤酵母、CHO细胞表达体系的表达上清、纯化中间体与成品；
2. 抗体与融合蛋白：单克隆抗体、双特异性抗体、Fc融合蛋白、纳米抗体与抗体偶联药物中间体；
3. 酶与活性蛋白：限制性内切酶、聚合酶、蛋白酶、诊断用工具酶与工业酶制剂；
4. 食品与营养蛋白：浓缩乳清蛋白、大豆分离蛋白、豌豆蛋白、胶原蛋白肽与蛋白棒基料；
5. 标准品与科研样品：蛋白标准物质、质控品、层析馏分与冻干复溶样品。
检测方法
1. GB/T 16631-2008 高效液相色谱法通则，规范反相色谱与分子排阻色谱测定主峰纯度、单体纯度的仪器及系统适用性要求；
2. GB/T 27417-2017 合格评定 化学分析方法确认和验证指南，用于纯度方法的专属性、线性、精密度与定量下限验证；
3. GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法，一级水用于色谱与质谱流动相及样品配制；
4. GB 5009.5-2016 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定，作为食品蛋白粉纯度百分比换算的含量基准；
5. 《中国药典》2020年版四部分子排阻色谱法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法等通则方法，配套CE-SDS与肽图分析用于纯度谱图判定与确证。
检测设备
1. 高效液相色谱仪：四元梯度泵与二极管阵列检测器，波长190-800nm，承担主峰纯度与单体纯度测定；
2. SEC-MALS联用系统：18角度激光光散射，分子量测定范围10³-10⁷Da，确证聚集体与片段绝对分子量；
3. 毛细管电泳仪：配SDS凝胶填充毛细管与紫外检测器，完成CE-SDS还原与非还原纯度分析；
4. 垂直凝胶电泳系统：凝胶浓度4%-20%，考马斯亮蓝与银染双染色方案，条带扫描灵敏度1-10ng；
5. 液质联用系统：高分辨质谱质量精度达ppm级，用于肽图序列覆盖与分子量确证；
6. 全波长酶标仪：波长范围200-1000nm，双波长法完成宿主细胞蛋白酶联免疫定量；
7. 微量紫外-可见分光光度计：A280与A260比值核查核酸污染，最小取样量低至1-2微升；
8. 荧光定量分析仪：配残留DNA荧光染料试剂盒，定量下限达pg级；
9. 高速冷冻离心机：最高转速15000rpm，控温4℃，用于样品澄清与不溶颗粒去除；
10. 超微量天平：可读性0.001mg，用于标准品称量与定量溶液配制。