可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| 重组蛋白与抗体样品 | 大肠杆菌、毕赤酵母、CHO表达体系的纯度放行与工艺可比性研究 | 蛋白含量、纯度与聚集体、分子量、等电点、细菌内毒素 | 《中国药典》四部蛋白质含量测定法；SEC-HPLC；cIEF |
| 酶与活性蛋白样品 | 工具酶、诊断用酶、工业酶制剂的活力标定与比活力核算 | 酶活力、比活力、蛋白含量、热稳定性 | 分光光度动力学法；GB 5009.5-2016 |
| 食品与营养蛋白粉 | 大豆分离蛋白、浓缩乳清蛋白、豌豆蛋白的标签核验与产品定级 | 蛋白质含量（干基/湿基）、水分、灰分、非蛋白氮掺伪筛查 | GB 5009.5-2016；GB/T 24870-2010 近红外快筛 |
| 饲料与发酵原料 | 豆粕、鱼粉、玉米蛋白粉、酵母浸粉的原料验收与配方设计 | 粗蛋白、真蛋白、非蛋白氮、脲酶活性 | GB/T 6432-2018 凯氏定氮法 |
| 科研与纯化中间品 | 细胞裂解上清、柱层析馏分、冻干复溶样品的过程监控 | 浓度快测、纯度估算、内毒素与微生物负荷 | BCA法、Bradford法；细菌内毒素检查法（凝胶法） |
检测项目
1. 蛋白质含量：紫外A280法线性范围0.05-2mg/mL，BCA法20-2000μg/mL，凯氏定氮适用0.1-100mg氮量程，结果按湿基或干基报告；
2. 纯度与聚集体：SDS-PAGE条带纯度与SEC-HPLC单体峰面积百分比双口径，重组蛋白放行纯度典型要求不低于95%；
3. 分子量与亚基组成：SEC-MALS测定范围10³-10⁷Da，区分单体、片段与聚集体并给出绝对分子量；
4. 等电点与电荷异质性：cIEF测定pI范围3-10，分辨率0.05pH，监测酸性变异体与脱酰胺修饰；
5. 细菌内毒素：动态浊度法鲎试剂检测范围0.01-100EU/mL，限值按样品用途与使用剂量折算。
检测范围
1. 重组蛋白：大肠杆菌、毕赤酵母、CHO细胞表达体系的表达上清与纯化成品；
2. 抗体与融合蛋白：单克隆抗体、双特异性抗体、Fc融合蛋白、纳米抗体；
3. 酶与活性蛋白：蛋白酶、脂肪酶、限制性内切酶、聚合酶、诊断用工具酶；
4. 食品与营养蛋白：大豆分离蛋白、浓缩乳清蛋白、豌豆蛋白、胶原蛋白肽、蛋白棒基料；
5. 饲料与发酵原料：豆粕、鱼粉、玉米蛋白粉、酵母浸粉、发酵菌体蛋白。
检测方法
1. GB 5009.5-2016 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定（凯氏定氮法、分光光度法、燃烧法）；
2. GB/T 6432-2018 饲料中粗蛋白的测定 凯氏定氮法；
3. ISO 8968-1:2014 乳与乳制品 氮含量的测定 凯氏原理；
4. ISO 20483:2013 谷物和豆类 氮含量测定和粗蛋白质含量计算 凯氏法；
5. GB/T 24870-2010 粮油检验 大豆粗蛋白质、粗脂肪含量的测定 近红外法；
6. 《中国药典》2020年版四部 蛋白质含量测定法与细菌内毒素检查法，配套SDS-PAGE电泳与分子排阻色谱表征纯度、亚基与聚集体。
检测设备
1. 紫外-可见分光光度计：波长190-1100nm，光谱带宽1nm，配微量比色皿用于A280定量；
2. 全自动凯氏定氮仪：消解温度420℃，蒸馏滴定一体化，滴定分辨率0.01mL；
3. 杜马斯快速定氮仪：燃烧温度1050℃，单样3-4分钟，氮检测限0.01mg；
4. 高效液相色谱仪：四元梯度泵与二极管阵列检测器，配分子排阻色谱柱；
5. SEC-MALS联用系统：18角度激光光散射，分子量测定范围10³-10⁷Da；
6. 毛细管等电聚焦电泳仪：pI覆盖3-10，分辨率0.05pH，配紫外检测器；
7. 垂直凝胶电泳系统：凝胶浓度4%-20%，考马斯亮蓝染色灵敏度1-10ng；
8. 动态浊度法内毒素测定仪：检测范围0.01-100EU/mL，恒温37℃孵育；
9. 高速冷冻离心机：最高转速15000rpm，控温4℃，用于样品前处理澄清；
10. 近红外光谱仪：扫描波长1000-2500nm，用于蛋白粉粗蛋白快速筛查。