检测项目

1.病原菌形态学鉴定:观测冬孢子堆直径(20-150μm)、担孢子形态(椭圆形至肾形,尺寸12-188-11μm)及表面纹饰特征

2.分子生物学检测:采用ITS1/ITS4引物进行rDNA扩增(目标片段长度550-600bp),比对GenBank数据库BLAST分析

3.生理生化特性测试:测定菌丝生长温度范围(15-28℃)、最适pH值(5.8-6.5)及碳源利用谱

4.寄主范围验证:人工接种试验验证对油松(Pinustabuliformis)、华山松(Pinusarmandii)等树种的侵染率

5.抗药性分析:测定苯醚甲环唑(0.05-1.6mg/L)、嘧菌酯(0.1-3.2mg/L)等药剂的EC50值

检测范围

1.松木原材及加工品:包括建筑用材、包装板材的边材与心材样本

2.松属植物活体组织:针叶基部锈孢子器、枝干溃疡病斑样本

3.育苗基质:苗圃土壤中越冬担孢子的密度测定(≥500孢子/g为阳性)

4.树脂制品:采集松脂分泌物进行PCR抑制物净化处理

5.运输工具表面残留物:集装箱木质衬垫的孢子洗脱液检测

检测方法

1.ASTMD7786-2019《木材病原真菌的分子生物学鉴定规程》

2.ISO21571:2020《食品与饲料中微生物DNA提取技术规范》(适用于植物材料)

3.GB/T31755-2015《松疱锈病菌检疫鉴定方法》形态学判定标准

4.LY/T2567-2015《林业有害生物检测技术规程》现场采样规范

5.SN/T1841-2019《植物病原真菌实时荧光PCR检测通则》

检测设备

1.OlympusBX53研究级显微镜:配备DP27摄像系统,实现1600显微测量精度

2.Bio-RadT100PCR仪:支持梯度PCR程序(温度精度0.2℃)

3.ThermoNanoDropOne超微量分光光度计:DNA纯度检测(A260/A280比值1.8-2.0)

4.EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机:最大转速30,000rpm,用于孢子富集

5.IlluminaMiSeq测序平台:开展ITS区全序列分析(读长2300bp)

6.LeicaCM1950冷冻切片机:制作10μm厚度的病斑组织切片

7.MemmertIPP110培养箱:温度控制范围0-70℃(波动度0.3℃)

8.SartoriusQuintix224-1CN分析天平:称量精度0.1mg(符合GB/T26428要求)

9.ThermoScientificHeratherm高级烘箱:木材样本预处理(105℃2℃烘干至恒重)

10.QiagenQIAcube全自动核酸纯化仪:完成CTAB法DNA提取流程