可送检的样品类型与对应检测项目

样品类型 典型应用场景 主要检测项目 常用方法 / 参考
根际促生细菌（PGPR）培养上清 荧光假单胞菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌等促生菌株筛选与功能鉴定 铁载体定性活性（晕圈直径比）、铁载体单位（SU）、铁螯合率、铁载体类型 GB/T 41727-2022《农用微生物菌剂功能评价 技术规程》；CAS通用显色法（Schwyn & Neilands，1987）
农用微生物菌剂 芽孢杆菌菌粉、复合微生物肥料功能菌种出厂评价与登记检验 功能菌株铁载体产生活性、产铁载体水平分级、菌株一致性复核 GB/T 41727-2022；GB 20287-2006《农用微生物菌剂》；GB/T 41729-2022《复合型微生物肥料生产质量控制技术规程》
生防真菌发酵液 哈茨木霉、绿色木霉、青霉等生防菌菌株拮抗能力与营养竞争机制研究 铁载体定性筛选、液体比色定量、儿茶酚型与异羟肟酸型鉴别 CAS蓝色平板覆盖法；Arnow比色法（1937）；Csaky比色法（1948）
病原微生物研究样品 铜绿假单胞菌、大肠杆菌、致病性假单胞菌铁获取能力与毒力相关性评价 吡哆苷型铁载体荧光定量、铁载体产量、低铁应答产量比较 荧光分光光度法（激发约405 nm/发射约460 nm）；HPLC定量（C18反相柱）
海洋与极端环境分离菌 深海、高盐、低温环境中新型铁载体产生菌的资源发掘 铁载体初筛、化学型分类、液质联用结构推测 CAS液体比色法结合LC-MS/MS联用分析（质量范围m/z 5-2000）
铁载体纯品与粗提物 去铁胺、肠杆菌素等标准品及发酵粗提液的含量与纯度评价 主成分含量（μmol/L或μg/mL）、纯度、铁结合当量 HPLC外标法定量（DAD检测器190-800 nm）；去铁胺标准曲线法
微生物-植物互作体系样品 共培养上清、根际土壤浸提液中竞争性铁摄取与互作效应研究 可溶性铁载体残留量、螯合活性比较、不同处理组产量差异 CAS液体比色法（630 nm吸光度下降法）配合缺铁培养基平行培养

检测项目

1. 铁载体定性活性：CAS蓝色平板晕圈直径比（晕圈D/菌落d），比值1.0-4.0以上，1.5以上判为中高产菌株

2. 铁载体定量：CAS液体比色法630 nm吸光度下降法，铁载体单位SU=（Ar-As）/Ar×100%，分级0-100%

3. 铁载体类型鉴别：儿茶酚型（Arnow法约510 nm显色）与异羟肟酸型（Csaky法）分类鉴定

4. 吡哆苷型铁载体定量：荧光法激发405 nm/发射460 nm，定量范围1-500μg/mL

5. 铁螯合能力：Fe³⁺螯合率0-100%，以去铁胺（去铁敏）标准曲线换算铁载体当量浓度（μmol/L）

检测范围

1. 细菌培养上清：荧光假单胞菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、根瘤菌等

2. 真菌发酵液：哈茨木霉、绿色木霉、青霉、曲霉等生防与工业菌株

3. 农用微生物菌剂：芽孢杆菌菌粉、复合微生物肥料功能菌种

4. 铁载体纯品与标准品：去铁胺、肠杆菌素、吡哆苷等

5. 环境分离菌株：土壤、根际、海洋及高盐极端环境来源样品

检测方法

1. GB/T 41727-2022 农用微生物菌剂功能评价 技术规程（铁载体产生功能评价）

2. CAS通用显色法（Schwyn & Neilands，1987）铬天青S-铁-十六烷基三甲基溴化铵三元复合物630 nm定量

3. CAS蓝色平板覆盖法 铁载体产生菌定性筛选与晕圈直径比测量

4. Arnow比色法（1937）儿茶酚型铁载体显色测定（约510 nm）

5. Csaky比色法（1948）异羟肟酸型铁载体显色测定

6. HPLC及LC-MS/MS联用法 C18反相色谱分离定量与结构解析

检测设备

1. 酶标仪：波长200-999nm，96孔板读数，吸光度重复性±0.002Abs

2. 紫外可见分光光度计：波长190-1100nm，光谱带宽1nm

3. 荧光分光光度计：激发/发射200-900nm，信噪比不低于5000

4. 高效液相色谱仪：C18反相柱，DAD检测器190-800nm

5. 三重四极杆液质联用仪：质量范围m/z 5-2000，质量数精度0.01%

6. 恒温振荡培养箱：温度4-60℃，转速50-400rpm

7. 高速冷冻离心机：最高转速15000rpm以上，温控-10-40℃

8. 电热恒温培养箱：室温+5-65℃，温度波动±0.5℃

9. 超净工作台：洁净度ISO 5级（百级）

10. 菌落成像分析系统：晕圈与菌落直径测量精度0.01mm